Desarrollo y validación de métodos bioanalíticos LC-MS/MS
Toda conclusión de un estudio BA/BE es un número generado por un ensayo analítico. Nuestro laboratorio bioanalítico desarrolla, valida y aplica métodos LC-MS/MS conforme a ICH M10, desde moléculas pequeñas de rutina hasta péptidos como la semaglutida.
validados
acoplados
validación
centro en Pune
¿Qué es el desarrollo y la validación de métodos bioanalíticos?
El desarrollo y la validación de métodos bioanalíticos consisten en construir un ensayo que mida un fármaco en una matriz biológica (normalmente plasma humano) con exactitud, precisión y reproducibilidad, y luego demostrar su desempeño mediante un protocolo formal de validación. Todo parámetro farmacocinético de un expediente BA/BE se remonta a este trabajo: si el método es deficiente, ninguna estadística posterior puede salvar el estudio.
Nuestro laboratorio desarrolla y valida métodos en equipos LC-MS/MS de triple cuadrupolo acoplados de AB Sciex, dentro de nuestro centro de investigación clínica de 17 000 pies cuadrados en Pune. Nuestra biblioteca activa cuenta con 75+ métodos validados que abarcan ácidos, bases, hormonas y moléculas de vida media larga, y se extiende al terreno de las moléculas grandes: validación de semaglutida a 1 ng/ml en plasma humano.
La validación se rige por la guía ICH M10, el estándar armonizado que hoy esperan la US FDA, la EMA y otras agencias: cubre selectividad, calibración, exactitud y precisión, efecto matriz, estabilidad e integridad de la dilución, y continúa en el análisis de muestras de estudio con reanálisis de muestras incurridas. Los patrocinadores recurren al laboratorio de dos maneras: como motor bioanalítico de un estudio BA/BE realizado por Celesta, o como proveedor independiente de desarrollo y validación de métodos para estudios realizados en otros centros.
Validación completa, parcial y cruzada
ICH M10 define tres alcances de validación; saber cuál de ellos exige realmente un cambio ahorra semanas.
| Aspecto | Validación completa | Validación parcial | Validación cruzada |
|---|---|---|---|
| Cuándo se aplica | Un método nuevo, un analito nuevo o una matriz nueva | Modificaciones de un método ya validado | Dos métodos o dos laboratorios que generan datos dentro de un mismo estudio o expediente |
| Desencadenante típico | Primer estudio de la molécula en esa matriz | Cambio de anticoagulante, cambio de instrumento, transferencia dentro de un laboratorio, modificación del LLOQ | Cambio de método a mitad del programa o bioanálisis en varios centros |
| Alcance | Todos los parámetros: selectividad, calibración, exactitud, precisión, efecto matriz, estabilidad y más | Desde una corrida de exactitud y precisión hasta una validación casi completa, según lo justifique el cambio | Comparación de controles de calidad (QC) y muestras incurridas entre los dos métodos o centros |
Qué cubre una validación completa
Selectividad y especificidad
Ausencia de señales interferentes para el analito y el estándar interno en matriz blanco procedente de múltiples fuentes.
Calibración e intervalo
Una curva caracterizada desde el LLOQ hasta el ULOQ que abarca las concentraciones que producirá el estudio.
Exactitud y precisión
Dentro del ±15 % del valor nominal (±20 % en el LLOQ) entre corridas, días y analistas.
Efecto matriz y recuperación
Supresión iónica y eficiencia de extracción cuantificadas en la matriz real, no supuestas.
Estabilidad
Estabilidad en mesa de trabajo, en ciclos de congelación y descongelación, de la muestra procesada y en almacenamiento prolongado, cubriendo las condiciones del estudio.
Arrastre e integridad de la dilución
Inyecciones limpias después del ULOQ y dilución comprobada de las muestras de estudio que superan el intervalo.
Sensibilidad a nivel de péptidos, validada
Es fácil presumir de una biblioteca de métodos y difícil demostrarla. La nuestra cuenta hoy con 75+ métodos LC-MS/MS validados, y entre los trabajos recientes figura la validación de semaglutida a 1 ng/ml en plasma humano: una cuantificación de moléculas grandes con una sensibilidad que la mayoría de los laboratorios ni siquiera intenta alcanzar. Si su molécula es difícil, esa es justamente la conversación que más disfrutamos.
Dónde se realiza este trabajo
De la molécula al dato reportable
- 01
Factibilidad y estándares de referencia
Revisión de la química de la molécula, selección del estándar interno y obtención de los estándares de referencia y de la matriz.
- 02
Desarrollo del método
Extracción, cromatografía y transiciones MS/MS optimizadas hasta que el método sea robusto, no simplemente funcional.
- 03
Validación según ICH M10
El conjunto completo de parámetros ejecutado bajo protocolo, con un informe de validación listo para el escrutinio regulatorio.
- 04
Análisis de muestras de estudio
Análisis por lotes con criterios de aceptación de calibración y QC en cada corrida, y reanálisis de muestras incurridas según el plan.
- 05
Informe
Un informe bioanalítico alineado con el informe de estudio clínico, trazable desde el cromatograma original hasta la concentración reportada.
Por qué los patrocinadores nos eligen: Servicios bioanalíticos
- 75+ métodos LC-MS/MS validados, en crecimiento continuo
- Capacidad comprobada en moléculas grandes: validación de semaglutida a 1 ng/ml en plasma humano
- Equipos LC-MS/MS de triple cuadrupolo acoplados de AB Sciex
- Validación alineada con ICH M10, diseñada para la revisión de la US FDA y la EMA
- Servicios de laboratorio independientes o bioanálisis integrado en estudios BA/BE
- Reanálisis de muestras incurridas y trazabilidad total de los datos como estándar
Servicios bioanalíticos: preguntas frecuentes
1. ¿Qué es la validación de métodos bioanalíticos?
2. ¿Qué parámetros exige la guía ICH M10 para la validación?
3. ¿Qué exactitud y precisión son aceptables en un método bioanalítico?
4. ¿Cuál es la diferencia entre validación completa, parcial y cruzada?
5. ¿Qué es el reanálisis de muestras incurridas (ISR)?
6. ¿Se pueden desarrollar métodos LC-MS/MS para péptidos y moléculas grandes?
7. ¿Cuánto tiempo toman el desarrollo y la validación de un método bioanalítico?
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